Contaglobuli automatico ADVIA 2120i Hematology Systems
Centrifuga per cellule “Cytospin” Scientific Bioptica
Centrifuga Eppendorf 5415
Flusso di lavoro:
I campioni vengono accettati e (se conformi) etichettati con un codice interno univoco e colorati con May-Grunwald-Giemsa rapida quindi esaminati da patologo clinico. Nel caso di versamenti la quantità di cellule ed eritrociti viene determinata dal contaglobuli ADVIA 2120i. Il campione, quindi, viene centrifugato, allestito il vetrino e colorato. Quando richiesto si esegue l’analisi biochimica del liquido e la misurazione del peso specifico tramite refrattometro.
Nei casi più complessi i vetrini vengono discussi con altri patologi clinici. Tutti i campioni vengono refertati in giornata o entro il giorno successivo.
Real time RT- PCR (Retro Trascrizione inversa) per la ricerca di virus ad RNA.
Strumenti:
Real-time PCR system (StepOne Abpplied Biosystems)
Centrifuga da banco (Eppendorf)
Thermomixer (Eppendorf)
Flusso di lavoro:
I campioni biologici che arrivano in laboratorio, dopo essere stati registrati e etichettati con un codice univoco, vengono sottoposti ad estrazione degli acidi nucleici DNA e/o RNA, tramite kit commerciali di altissima qualità con metodiche messe a punto in base alla tipologia di campione (sangue, feci, tampone …) e al patogeno che deve essere analizzato (protozoo, virus …). L’acido nucleico estratto viene poi sottoposto ad amplificazione tramite Real time PCR, metodica che permette di avere risultati senza ulteriori passaggi (ad es. elettroforesi su gel e visualizzazione ad UV) limitando la possibilità di contaminazioni.
Le amplificazioni sono condotte secondo le linee guida dei centri di referenza (ad es per la Leishmania e la Giardia) o attraverso kit specifici che vengono aggiornati continuamente in base alle informazioni presenti in letteratura.
Flusso di lavoro:
Ogni estratto viene amplificato in doppio e contemporaneamente viene amplificato un controllo positivo ed uno negativo a conferma della buona riuscita della reazione e l’esclusione di possibili contaminazioni. Viene, inoltre, utilizzato un sistema di controllo positivo esogeno che, inserito nelle prime fasi di lavorazione del campione, conferma il buon esito dell’estrazione e dell’amplificazione permettendo anche di distinguere campioni negativi da quelli che non amplificano per la presenza di inibitori.
Il laboratorio annualmente partecipa, con buon esito, al Ring Test per PCR leishmania organizzato dall’ISTITUTO ZOOPROFILATTICO SPERIMENTALE DELLA SICILIA (IZSSI) National Reference Centre for Leishmaniasis (C.Re.Na.L.), OIE Reference Laboratory Leishmaniosis, a conferma delle corrette procedure seguite dal Laboratorio
Nella sezione "APPROFONDIMENTI" del sito sono disponibili Informazioni dettagliate sulle più diffuse malattie, sul tipo di campione da prelevare e le specifiche del test molecolare richiesto. È inoltre possibile contattare il laboratorio per ulteriori chiarimenti.
Contaglobuli automatico ADVIA 2120i Hematology Systems
Microscopio Nikon Eclipse Ci
Microscopio Zeiss iLED
Flusso di lavoro:
I campioni vengono accettati e (se conformi) etichettati con un codice interno univoco e fatti roteare su un agitatore. Viene sempre eseguito uno striscio ematico (qualora non ne sia stato allegato uno idoneo). Si procede, quindi alla colorazione degli stessi con May-Grunwald-Giemsa rapida. I campioni vengono poi analizzati dal citofluorimetro ADVIA 2120 e tutti gli strisci ematici vengono esaminati al microscopio da un patologo clinico.
Controlli di qualità:
Quotidianamente vengono effettuati controlli interni di qualità.
Servizio di consulenza:
Garantendovi la refertazione giornaliera vi ricordiamo che è sempre possibile richiedere il servizio di consulenza ai nostri patologi clinici.
Real time RT- PCR (retro trascrizione inversa) per la ricerca di virus ad RNA.
Strumenti:
Plate reader DAS
Plate washer DAS
Microscopio Nikon Eclipse Ci
Microscopio Zeiss iLED
Bagnetto termostatato
Real-time PCR Systems (StepOne Applied Biosistems)
Specifiche dei test:
In caso di sospetto di una malattia infettiva è possibile eseguire i test per il dosaggio degli anticorpi (test sierologici: ELISA e IFA) oppure per la ricerca del genoma dell’agente patogeno (PCR).
Test sierologici:
permettono di rilevare e dosare anticorpi contro specifici agenti presenti nel siero del paziente per l’accertamento all’esposizione dell’animale ad un determinato patogeno.
IFA:
saggio di immunofluorescenza indiretta. Gli anticorpi sono rilevati usando anti-anticorpi fluorescenti visualizzabile attraverso il microscopio a fluorescenza, è possibile fare una titolazione esatta attraverso diluizioni seriali.
ELISA:
test immuno-enzimatico. Gli anticorpi sono rilevati con metodo colorimetrico e la quantificazione avviene tramite spettrofotometro.
PCR:
il test è finalizzato alla ricerca dell’acido nucleico del patogeno tramite reazioni di amplificazione (Real-time PCR e Real time RT-PCR (Retro trascrizione inversa per la ricerca di virus ad RNA).Maggiori informazioni sono disponibili nella sezione di biologia molecolare.
Flusso di lavoro:
I campioni che arrivano in laboratorio vengono registrati nel sistema gestionale ed etichettati con un codice a barre univoco, sierati e processati secondo le indicazioni dei diversi kit. Nella lavorazione viene inserito un siero positivo ed uno negativo per garantire l’affidabilità dei risultati.
Controlli di qualità:
I test sono condotti secondo le linee guida dei centri di referenza ( per la Leishmania e Giardia) o le procedure indicate in ogni kit validati internamente.
Il laboratorio, inoltre, annualmente partecipa ai RING Test organizzati dall’ISTITUTO ZOOPROFILATTICO SPERIMENTALE DELLA SICILIA (IZSSI) National Reference Centre for Leishmaniasis (C.Re.Na.L.), OIE Reference Laboratory Leishmaniosis, sia per IFA che per PCR, a conferma delle corrette procedure seguite dal laboratorio e l’allineamento dei risultati con il centro di referenza.
I campioni giunti in laboratorio vengono accettati ed etichettati con un codice interno dal personale tecnico per poi essere inviati ai reparti ai quali sono destinati. La processazione strumentale dei campioni viene effettuata dal personale tecnico, mentre la validazione dei risultati è gestita da un patologo clinico così da mantenere alto il livello qualitativo e di ridurre al minimo gli errori analitici. I risultati validati sono quindi trasmessi dai vari strumenti al programma gestionale che invia il referto definitivo al medico veterinario. I campioni vengono refertati in giornata, fatta eccezione di alcuni test particolari che possono essere refertati il giorno successivo all’accettazione o in tempi più lunghi qualora siano riferiti a laboratori specialisti esteri.
Controlli di qualità:
Il reparto di biochimica clinica ed endocrinologia effettua quotidianamente test di controllo con seri standard e le calibrazioni dei reattivi.
Servizio di consulenza:
Tutto il personale di laboratorio è sempre a disposizione del medico veterinario in caso siano necessari dei chiarimenti riguardo la modalità di prelievo, la conservazione del campione, la scelta di test appropriati per ogni paziente e chiarimenti riguardo l’interpretazione dei risultati delle analisi ottenuti.
Inoltre, informazioni utili sulle tecniche di prelievo, allestimento e conservazione del campione sono reperibili sia all'interno del listino che del nostro sito.
Microbiologia
Dott.ssa Myselis Santiago-Reyes
Parassitologia, esami urinari
Dott.ssa Myselis Santiago-Reyes
Dr. Simone Balzano
L'esame parassitologico consiste nella ricerca dei parassiti (elminti, protozoi o coccidi) e/o delle loro uova mediante osservazione al microscopio del campione di feci.
Esame Parassitologico:
al fine di concentrare il campione, le feci vengono sciolte in una soluzione salina in tal modo i parassiti e/o le loro uova o cisti per flottazione salgono in superficie ed esaminati al microscopio. Ciascun parassita/uovo/ciste è caratterizzato da forma, dimensione e struttura interna peculiari, che permettono di discriminare tra i diversi parassiti.
Mini-Flotac:
E’ un esame semiquantitativo, è possibile contare il parassiti presenti tramite le apposite camere di lettura. Il test risulta molto sensibile e accurato poiché la flottazione delle feci in una o due diverse soluzioni saline concentrando il campione, facilitano l’identificazione del parassita. Questa metodica permette di effettuare contemporaneamente la diagnosi di uova, larve, oocisti e cisti di elminti e protozoi nelle feci.
Esame chimico fisico:
L'esame si basa sull'osservazione macroscopica e microscopica delle caratteristiche morfologiche, fisiche e chimiche, quali aspetto, consistenza, pH, presenza di sangue, grassi e tripsina, presenza di residui alimentari e parassiti.
Coprocoltura:
si esegue seminando il campione di feci su una batteria di terreni al fine di identificare i principali patogeni.
Urine
Esame urine:
Il test è diviso in tre parti: esame fisico (che analizza colore e aspetto delle urine), esame chimico (che rivela le eventuali sostanze presenti nelle urine e la loro quantità) ed esame microscopico del sedimento urinario che può rilevare la presenza di precipitato cellulare o di cristalli salini. È possibile eseguire test di chimica urinaria.
Flusso di lavoro
I campioni che arrivano in laboratorio vengono registrati nel sistema gestionale ed etichettati con un codice a barre univoco, e sottoposti alle diverse procedure i lavorazione.
I campioni vengono preparati da un tecnico e la lettura al microscopio viene eseguita da un patologo. La refertazione avviene in giornata, tranne quei campioni che prevedono lavorazioni più lunghe (larve e colture).
